Προετοιμασία του αντιδραστηρίου Schiff. Μέθοδος Schiff - ιωδικό οξύ. Συντομευμένο στάδιο πρόσληψης - δοκιμή, δοκιμή, δοκιμή ...
(Ν. Σιφ, 1834-1915, Γερμανός βιοχημικός)
αντιδραστήριο για τον ποιοτικό προσδιορισμό της ομάδας αλδεΰδης οργανική ύλη, που είναι ένα διάλυμα φουξινοθειικού οξέος. χρησιμοποιείται για την ιστοχημική ανίχνευση υδατανθράκων και δεοξυριβονουκλεϊκού οξέος.
Αξία ρολογιού Schiffa Reactiveσε άλλα λεξικά
Αντιδραστήριο Μ.- 1. Ουσία που χρησιμοποιείται για τη διεξαγωγή μιας χημικής αντίδρασης.
Επεξηγηματικό Λεξικό Efremova
Αντιδραστήριο- αντιδραστήριο, μ. (από το λατινικό πρόθεμα re - back και activus - αποτελεσματικό) (χημ.). Ουσία, η προσθήκη της οποίας σε άλλη ουσία προκαλεί μια ορισμένη χημική αντίδραση και έτσι ........
Επεξηγηματικό Λεξικό Ushakov
Αντιδραστήριο- -ΕΝΑ; μ. [από λατ. re - κατά και activus - αποτελεσματικό] Chem. Μια ουσία με επακριβώς καθορισμένη σύνθεση και καθαρότητα που χρησιμοποιείται για τη διεξαγωγή μιας χημικής αντίδρασης. Χημική ουσία........
Επεξηγηματικό λεξικό του Kuznetsov
Benedicta Reactive- (S. R. Benedict, 1884-1936, Αμερικανός βιοχημικός) ένα αντιδραστήριο για την ανίχνευση της γλυκόζης στα ούρα, το οποίο είναι ένα υδατικό διάλυμα θειικού χαλκού, κιτρικού νατρίου (ή καλίου) και ανθρακικού νατρίου.
Μεγάλο Ιατρικό Λεξικό
Günzburg Reaktiv- (A. O. Gunzburg, γεννηθείς το 1861, Γερμανός γιατρός) αντιδραστήριο που περιέχει phloroglucinol, βανιλίνη και αλκοόλη, που χρησιμοποιείται στον ποιοτικό προσδιορισμό του υδροχλωρικού οξέος στο γαστρικό υγρό.
Μεγάλο Ιατρικό Λεξικό
Αντιδραστήριο- (αντιδραστήριο), ουσία που εμπλέκεται σε χημική αντίδραση. Ο όρος χρησιμοποιείται συχνά για να αναφέρεται σε ένα τυπικό εργαστηριακό αντιδραστήριο, δηλαδή σε μια ουσία που χρησιμοποιείται ........
Επιστημονικό και τεχνικό εγκυκλοπαιδικό λεξικό
Αντιδραστήριο Strzyzovsky- (S. Strzyzowski, γενν. το 1868, Ελβετός βιοχημικός) μίγμα εθυλική αλκοόλη, παγόμορφο οξικό και υδροϊωδικό οξύ, που χρησιμοποιούνται στην ιατροδικαστική για την ανίχνευση αίματος σε ........
Μεγάλο Ιατρικό Λεξικό
Sulkovich Reactive- (N. W. Sulkowitch, γεννημένος το 1906, Αμερικανός ουρολόγος) ένα αντιδραστήριο που περιέχει 2,5 g οξαλικού οξέος, οξαλικού αμμωνίου και πάγου οξικό οξύανά 150 ml του υδατικού τους διαλύματος· μεταχειρισμένος........
Μεγάλο Ιατρικό Λεξικό
Αντιδραστήριο κοπής- (Ι. Α. Folling· συν. υγρό του Felling) αντιδραστήριο για τον ποιοτικό και ποσοτικό προσδιορισμό των αλδεΰδων, των απλούστερων αναγωγικών σακχάρων και ορισμένων άλλων ουσιών ........
Μεγάλο Ιατρικό Λεξικό
Folina-chocalteu Reaktiv- (O. K. O. Folin, 1867-1934, Σουηδός φυσιολόγος και χημικός· V. Ciocalteu, 1890-1947, Ρουμάνος γιατρός και βιοχημικός) ένα μείγμα διαλυμάτων βολφραμίου νατρίου και μολυβδαινικού νατρίου, στο οποίο ........
Μεγάλο Ιατρικό Λεξικό
Αντιδραστήριο Schiff- (N. Schiff, 1834-1915, Γερμανός βιοχημικός) ένα αντιδραστήριο για τον ποιοτικό προσδιορισμό της ομάδας αλδεΰδης των οργανικών ουσιών, που είναι ένα διάλυμα θειικού οξέος φουξίνης· ........
Μεγάλο Ιατρικό Λεξικό
Αντιδραστήριο του Σιφ- (αντιδραστήριο Schiffs) - υδατικό διάλυμα φουξίνης, αποχρωματισμένο με διοξείδιο του θείου. Παρουσία αλδεΰδων, αυτό το διάλυμα γίνεται μπλε.
Ψυχολογική Εγκυκλοπαίδεια
Αντιδραστήριο του Σιφ (αντιδραστήριο του Σιφ)- υδατικό διάλυμα φουξίνης, αποχρωματισμένο με διοξείδιο του θείου. Παρουσία αλδεΰδων, αυτό το διάλυμα γίνεται μπλε.
ιατρικό λεξικό
Οι πολυσακχαρίτες είναι υψηλά μοριακά σάκχαρα που βρίσκονται στους ιστούς του σώματος τόσο σε καθαρή μορφή (γλυκογόνο) όσο και σε συνδυασμό με άλλες ουσίες (γλυκοπρωτεΐνες, πρωτεογλυκάνες).
Οι πιο συνηθισμένες μέθοδοι για την ανίχνευση πολυσακχαριτών είναι: η χρώση αντικειμένων με καρμίνη σύμφωνα με την Best και την αντίδραση PAS.
1. Η ανίχνευση καρμίνης με τη μέθοδο Best είναι μια εμπειρική μέθοδος και δεν πληροί αυστηρές ιστοχημικές απαιτήσεις. Χρησιμοποιείται ευρέως στην ιστοχημική πρακτική λόγω της διαθεσιμότητας και της φωτεινότητάς του. Η μέθοδος βασίζεται στη χρώση τμημάτων ενσωματωμένων σε παραφίνη ή σελοϊδίνη με υδατικό διάλυμα καρμίνης. Ως αποτέλεσμα, το γλυκογόνο γίνεται έντονο κόκκινο. Όταν χρωματίζονται με καρμίνη, εκτός από γλυκογόνο, μπορούν να χρωματιστούν και ορισμένοι κυτταρικοί κόκκοι, βλέννα, δερματοειδή όρια του επιθηλίου κ.λπ. Επομένως, πρέπει πάντα να ρυθμίζεται έλεγχος με διάσταση.
2. CHIC - αντίδραση (SHIF-ιωδικό οξύ). Η μέθοδος βασίζεται στο γεγονός ότι το υπεριωδικό κάλιο, όταν εκτίθεται σε πολυσακχαρίτες, οξειδώνει επιλεκτικά τις αλκοολικές ομάδες των ατόμων άνθρακα του τμήματος της εξόζης, μετατρέποντάς τις σε αλδεΰδες. Οι ελεύθερες ομάδες αλδεΰδης αντιδρούν στη συνέχεια με φουξίνη-θειικό οξύ για να δώσουν ένα ιώδες-κεράσι χρώμα.
Προετοιμασία διαλυμάτων:
1. Αντιδραστήριο Schiff (θειικό οξύ φουξίνης. 1 g βασικής φουξίνης διαλύεται σε 200 ml απεσταγμένου νερού (θερμοκρασία δωματίου), ανακινείται καλά για 3-5 λεπτά. Το διάλυμα διηθείται μέσω χάρτινου φίλτρου. 10 ml υδροχλωρικού 1 Ν οξύ και 1 g μεταδιθειώδους καλίου ή νατρίου Το διάλυμα σε καλά κλεισμένη φιάλη τοποθετείται σε σκοτεινό μέρος για 24 ώρες. καφέ χρώμαανάλογα με την ποιότητα του κύριου φούξιν. Για τον τελικό καθαρισμό της φουξίνης από ακαθαρσίες, προστίθενται 3-5 θρυμματισμένα δισκία ενεργού άνθρακα, ανακινούνται καλά και φιλτράρονται σε φιάλη με αλεσμένο πώμα. Το αντιδραστήριο φυλάσσεται καλύτερα στο ψυγείο. Για να ελέγξετε την ποιότητα του αντιδραστηρίου Schiff που προκύπτει, ρίξτε 5 ml του αντιδραστηρίου σε ένα μπουκάλι και προσθέστε 1 σταγόνα αδιάλυτης όξινης φορμαλίνης σε αυτό. Αν το αντιδραστήριο είναι εξαιρετικής ποιότητας, τότε μπροστά στα μάτια μας αποκτά το χρώμα του κύριου ματζέντα.
2. Θειούχο νερό. Σε 200 ml απεσταγμένου νερού προσθέστε 10 ml διαλύματος υδροθειώδους νατρίου 10% (Na2SO3) και 10 ml υδροξειδίου του νατρίου 1Ν. διάλυμα υδροχλωρικού οξέος. Το θειούχο νερό παρασκευάζεται πριν από την κατανάλωση και θα πρέπει να έχει τη χαρακτηριστική μυρωδιά του διοξειδίου του θείου (θειώδης ανυδρίτης (SO2).
Μέθοδος χρώσης παρασκευασμάτων:
1. Το υλικό στερεώνεται σε 10% φορμαλίνη, υγρά Carnoy's, Zenker, ενσωματωμένα σε παραφίνη.
2. Τα αποπαραφινωμένα τμήματα μεταφέρονται σε απεσταγμένο νερό.
3. Πότε θερμοκρασία δωματίουοι τομές οξειδώνονται με 0,5-1% υδατικό περιιωδικό κάλιο για 2-10 λεπτά. Το διάλυμα αποθηκεύεται στο σκοτάδι. Η συγκέντρωση εργασίας αυτού του διαλύματος και η διάρκεια της επώασης σε αυτό επιλέγονται ανάλογα με το αντικείμενο.
4. Πλένεται σε απεσταγμένο νερό για 10 λεπτά.
5. Τοποθετήστε τα τμήματα στο αντιδραστήριο Schiff για 10-30 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου στο σκοτάδι.
6. Τα τμήματα πλένονται με θειικό νερό τρεις φορές για 2 λεπτά. Μπορεί επίσης να παρασκευαστεί θειούχο νερό (ακριβώς πριν από την αντίδραση).
7. Πλένονται καλά σε τρεχούμενο και απεσταγμένο νερό, οι πυρήνες μπορούν να χρωματιστούν με 0,5% ανοιχτό πράσινο ή αιματοξυλίνη.
8. Αφυδατώστε σε αλκοόλες αυξανόμενης συγκέντρωσης, κλείστε σε βάλσαμο.
Αποτέλεσμα: οι υδατάνθρακες που περιέχουν εξόζη βάφονται κόκκινο-λιλά, γλυκογόνο - σε πιο έντονο σκούρο κόκκινο.
Έλεγχος: διάσπαση γλυκογόνου από αμυλάση ή διαστάση, αντίδραση ακετυλίωσης για αποκλεισμό ομάδων υδροξυλίου.
Είναι απαραίτητο να χρησιμοποιείτε χημικά καθαρά πιάτα, γυάλινες ράβδους. Μην εργάζεστε με μεταλλικούς γάντζους ή βελόνες. Οι τομές πρέπει να βάφονται με αντιδραστήριο Schiff στο σκοτάδι.
Με άφθονη ανίχνευση θετικής ουσίας PAS, το κυτταρόπλασμα των κυττάρων χρωματίζεται ομοιογενώς σε μωβ-κεράσι χρώμα.
SCHIFFA REACTIVE
Υδατικό διάλυμα φουξινοθειικού οξέος (f-ly I ή II). Χρησιμεύει για ποιοτική ανίχνευση αλδεΰδων. Κατά την αλληλεπίδραση Sh. r. με την αλδεΰδη RCHO, σχηματίζεται μια μωβ-ιώδες βαφή (μορφή III).
Το R-tion είναι πολύ ευαίσθητο (π.χ. μπορεί να προσδιοριστεί 1 μg φορμαλδεΰδης). Ταυτόχρονα, αρωματικό υδροξυαλδεΰδες, πολλές ακόρεστες δεν δίνουν χρώση. Ορισμένες (π.χ.), ακόρεστες ενώσεις, ανόρ. και οργ. βάσεις, ορισμένα άλατα ικανά για υδρόλυση και όλες οι ενώσεις που οξειδώνουν το θειικό οξύ οδηγούν στο σχηματισμό ροζ χρώματος. Επομένως, η εμφάνιση ενός ανοιχτού ροζ χρώματος δεν μπορεί να θεωρηθεί θετική. δοκιμή για αλδεΰδη.
Sh. r. λαμβάνεται με διέλευση SO 2 σε 0,025% διάλυμα νερούφούξιν μέχρι αποχρωματισμού. Κατά τον προσδιορισμό των ομάδων αλδεΰδης, είναι απαραίτητο να γίνει προκαταρκτικά φέρετε την οξύτητα σε pH 3 προσθέτοντας στο Sh. σε εσάς ή μίγμα ρυθμιστικού. Συνήθως πραγματοποιείται ένα πείραμα ελέγχου. Κατά τη φόρτωση rr φούξιν-θείο-μπορείτε να κοκκινίσετε.
Το R-tion στο οποίο βασίζεται η χρήση του Sh. R. ανακαλύφθηκε από τον G. Schiff το 1864.
Λιτ.: Guben-Weil, Μέθοδοι οργανικής χημείας, μτφρ. από Γερμανικά, 4η έκδ., τ. 2. Μέθοδοι ανάλυσης, Μ., 1963, σελ. 431-32; Ταυτοποίηση οργανικών ενώσεων, μεταφρ. από τα αγγλικά, Μ., 1983, σελ. 195-96; Mazor L., Μέθοδοι οργανικής ανάλυσης, μτφρ. από τα αγγλικά, Μ., 1986, σελ. 122-24.
Ι. Α. Κούτσεφ.
Χημική εγκυκλοπαίδεια. - Μ.: Σοβιετική Εγκυκλοπαίδεια. Εκδ. I. L. Knunyants. 1988 .
Δείτε τι είναι το "SCHIFFA REACTIVE" σε άλλα λεξικά:
- (H. Schiff; συνώνυμο του φουξινοθειικού οξέος) ένα αντιδραστήριο για τον ποιοτικό προσδιορισμό της ομάδας αλδεΰδης των οργανικών ενώσεων, που ανακαλύφθηκε από τον Hugo Schiff. Περιεχόμενα 1 Απόδειξη 2 Αποθήκευση ... Wikipedia
- (N. Schiff, 1834 1915, Γερμανός βιοχημικός) ένα αντιδραστήριο για τον ποιοτικό προσδιορισμό της ομάδας αλδεΰδης των οργανικών ουσιών, που είναι ένα διάλυμα θειικού οξέος φουξίνης. χρησιμοποιείται για την ιστοχημική ανίχνευση υδατανθράκων και ... ... Μεγάλο Ιατρικό Λεξικό
Αντιδραστήριο του Σιφ- φουξινοθειικό οξύ Αντιδραστήριο σχεδιασμένο για τον ποιοτικό προσδιορισμό ομάδων αλδεΰδης. χρησιμοποιείται στην αντίδραση Felgen για την ανίχνευση του DNA, καθώς και σε μια σειρά άλλων δοκιμών (για γλυκογόνο κ.λπ.). [Arefiev V.A., Lisovenko L.A. Αγγλικά Ρωσικά…… Εγχειρίδιο Τεχνικού Μεταφραστή
Αντιδραστήριο Schiff Αντιδραστήριο Schiff, φουξίνη θειικό οξύ. Αντιδραστήριο σχεδιασμένο για τον ποιοτικό προσδιορισμό ομάδων αλδεΰδης. χρησιμοποιήθηκε στην αντίδραση Feulgen
Υδατικό διάλυμα φουξίνης, αποχρωματισμένο με διοξείδιο του θείου. Παρουσία αλδεΰδων, αυτό το διάλυμα γίνεται μπλε.
Αντιδραστήριο του Σιφ.
Τι είναι?
Το αντιδραστήριο Schiff είναι ένα διάλυμα που συνδυάζεται χημικά με αλδεΰδες για να σχηματίσει ένα έντονο κόκκινο προϊόν. Αυστηρά μιλώντας, οι κετόνες αντιδρούν επίσης, αλλά για όλους τους πρακτικούς σκοπούς μπορούν να αγνοηθούν. Πολλά εξαρτήματα υφάσματος μπορούν να βαφτούν με αυτόν τον τρόπο. Το αντιδραστήριο Schiff παρασκευάζεται από παραροσανιλίνη επεξεργασμένη με θειικό οξύ (H2SO3). Αυτός είναι ο λόγος για την καταστροφή του χρωμοφόρου με την προσθήκη μιας ομάδας σουλφονικού οξέος στον κεντρικό άνθρακα. Το θειικό οξύ σχηματίζεται με τη διάλυση του διοξειδίου του θείου (SO2) στο νερό.
Σε ορισμένα, συνήθως παλαιότερα κείμενα, θα βρείτε το αντιδραστήριο του Schiff που αναφέρεται ως λευκοφουχσίνη . Κονσόλα leuco που σημαίνει άσπρο και αναφέρεται στην απώλεια χρώματος από το διάλυμα. Ωστόσο, λευκοβάση αναφέρεται σε ανηγμένες ενώσεις και το χρώμα του αποκαθίσταται με οξείδωση. Το αντιδραστήριο Schiff δεν έχει το χρώμα της παραροσανιλίνης στο πρωτότυπο. Μάλλον, μια νέα χρωματική ένωση παράγεται από έναν χημικό συνδυασμό με μια αλδεΰδη. Για το λόγο αυτό, σήμερα αναφέρεται συνήθως ως Αντιδραστήριο του Σιφ ή φουξινο θειικό οξύ.
Δεν φαίνεται να υπάρχει μεγάλη διαφορά σχετικά με την πηγή του θειικού οξέος. Γιατί είναι απλώς διοξείδιο του θείου διαλυμένο στο νερό. Υπάρχουν διάφοροι τρόποι για να το αποκτήσετε. Τέσσερις διαδικασίες που προτείνονται:
· Το αέριο διοξείδιο του θείου από τον κύλινδρο διοχετεύεται αργά μέσω του διαλύματος παραροσανιλίνης έως ότου το διάλυμα αρχίσει να αλλάζει χρώμα. Στη συνέχεια το δοχείο κλείνεται προσεκτικά και διατηρείται σε σκοτεινό μέρος, συνήθως μέχρι το πρωί ή περισσότερο.
Αγοράστε ένα έτοιμο διάλυμα θειικού οξέος. Η παραροσανιλίνη διαλύεται σε αυτό χωρίς υψηλή θερμοκρασία. Στη συνέχεια το δοχείο κλείνεται προσεκτικά και διατηρείται σε σκοτεινό μέρος, συνήθως μέχρι το πρωί ή περισσότερο.
· Μεταδιθειώδες ή θειώδες νάτριο ή κάλιο (εμπορικά δείγματα των οποίων προφανώς αποτελούνται κυρίως από μεταδιθειώδες) προστίθενται στο διάλυμα παραροσανιλίνης. Προστίθεται υδροχλωρικό οξύ, παράγοντας διοξείδιο του θείου σε διάλυμα. Στη συνέχεια το δοχείο κλείνεται προσεκτικά και διατηρείται σε σκοτεινό μέρος, συνήθως μέχρι το πρωί ή περισσότερο.
Αντιδραστήρια που αποσυντίθενται σε διάλυμα που παράγει διοξείδιο του θείου, όπως υδροθειώδες νάτριο (διθειονίτη) ή θειονυλοχλωρίδιο, προστίθενται στο διάλυμα παραροσανιλίνης. Στη συνέχεια το δοχείο κλείνεται προσεκτικά και διατηρείται σε σκοτεινό μέρος, συνήθως μέχρι το πρωί ή περισσότερο.
|
Το αντιδραστήριο Schiff πρέπει να είναι άχρωμο ή πολύ ανοιχτό κίτρινο. Ωστόσο, η παραροσανιλίνη μπορεί να περιέχει και άλλες βαφές, ειδικά εάν προέρχονται από ένα βασικό δείγμα ματζέντα που είναι μείγμα. Άλλες χρωστικές είναι συνήθως ομόλογες της παραροσανιλίνης, όπως η ροσανιλίνη και η ματζέντα II, αλλά παράγουν βαθύ κεχριμπαρένιο διαλύματα και μπορούν να χρωματίσουν τις αλδεΰδες καστανοκόκκινο. Αυτά τα πιο σκούρα προϊόντα μπορούν να αφαιρεθούν προσθέτοντας μια μικρή ποσότητα ενεργοποιημένης σκόνης. ξυλάνθρακας, ανακινώντας το διάλυμα για ένα λεπτό και διηθήστε. Μερικές φορές αυτή η θεραπεία δεν λειτουργεί και το διάλυμα παραμένει καφέ. Δυστυχώς, εάν προστεθεί αρκετός άνθρακας για να αφαιρεθεί πλήρως όλο το καφέ χρώμα λόγω αποχρωματισμού, το τελικό διαυγές διάλυμα μπορεί να παράγει μόνο ένα πολύ ανοιχτό χρώμα. Αυτό συνήθως σημαίνει ότι χρησιμοποιήθηκε ένα βασικό δείγμα ματζέντα που περιέχει μεγάλες ποσότητες μιας από τις άλλες βαφές. Εάν είναι διαθέσιμο, αγοράστε δείγματα βασικής φουξίνης που αναφέρονται ως κατάλληλα για το αντιδραστήριο Schiff ή αγοράστε παραροσανιλίνη. Όπως αναφέρθηκε παραπάνω, το αντιδραστήριο Schiff συνδυάζεται με αλδεΰδες για να παράγει ένα έντονο κόκκινο προϊόν. ΣΕ ΙστολογίαΑυτές οι αλδεΰδες προσκολλώνται σε, ή σχηματίζονται από, δομές ιστών, και γίνονται πολύ έντονο κόκκινο. Για όλες τις αλδεΰδες στους ιστούς, ο μηχανισμός είναι ο ίδιος. Η αλδεΰδη συμπυκνώνεται με το αντιδραστήριο Schiff για να σχηματίσει μια νέα ένωση, που προσκολλάται στον ιστό. Στη διαδικασία, το χρωμοφόρο μετατρέπεται και παράγει το χρώμα.
Το νέο κόκκινο προϊόν εμφανίζεται με δύο τύπους. Οι περισσότερες εξηγήσεις δίνονται από τον πρώτο - αυτό είναι τελικό προϊόν. Ωστόσο, ορισμένα κείμενα δίνουν μια εναλλακτική αναπαράσταση που περιλαμβάνει μία μόνο αλδεΰδη. Σε κάθε περίπτωση, το έγχρωμο προϊόν αποτελείται από αντιδραστήριο Schiff, μια αλδεΰδη και ένα αντιδραστήριο στο οποίο είναι συνδεδεμένη η αλδεΰδη. Η Kiernan ανέφερε ότι πρόσφατες μελέτες δείχνουν ότι το προϊόν είναι διαφορετικό από τα παραπάνω και υπάρχει ως ταυτομερές των δύο παρακάτω προϊόντων.
Άλλες βαφές μπορούν να χρησιμοποιηθούν για την παρασκευή αντιδραστηρίων τύπου Schiff. Συχνά αναφέρονται ως ψευδο-Σιφ αντιδραστήρια. Συνήθως είναι χρωματιστά, όχι εντελώς αποχρωματισμένα, αν και το χρώμα και η διαύγεια του διαλύματος συχνά αλλάζουν. Είναι πιθανό ότι οι υπολειμματικές ενώσεις χρώματος σε αυτά τα διαλύματα μπορεί να λεκιάσουν τους ιστούς με έναν ιοντικό μηχανισμό. Για να αφαιρέσετε αυτόν τον λεκέ, είναι σύνηθες να αντιμετωπίζετε τα τμήματα με όξινη αλκοόλη μετά τη χρώση. Οποιοδήποτε χρώμα παραμένει μετά την επεξεργασία με όξινη αλκοόλη είναι μια θετική αντίδραση από το ψευδο-αντιδραστήριο Schiff. Κανένα από αυτά τα ψευδο-αντιδραστήρια Schiff δεν έχει κερδίσει τη δημοτικότητα πουθενά κοντά στη δημοτικότητα του αντιδραστηρίου παραροσανιλίνης Schiff, και αυτή η λύση παραμένει το πρότυπο. Ο λόγος είναι ο λαμπερός και καθαρός κόκκινος χρωματισμός με το αντιδραστήριο παραροσανιλίνης του Schiff. Άλλες βαφές δίνουν ένα αχνό χρώμα, αν και λίγες είναι πραγματικά αποτελεσματικές. Τα διαλύματα που είναι πιο κοινά παρασκευάζονται με μια φθορίζουσα βαφή, την ακριφλαβίνη (βλ. παρακάτω), για παράδειγμα. Επιτρέπουν ένα θετικό αποτέλεσμα φθορισμού, το οποίο μπορεί να είναι πολύ χρήσιμο για την επίδειξη υλικών μυκητιακού τύπου, για παράδειγμα, που μπορεί να υπάρχουν σε μικρές ποσότητες. Το Culing απαριθμεί πολλές από αυτές τις βαφές, αρκετές από τις οποίες παρατίθενται εδώ. Για περισσότερες πληροφορίες, δείτε τα γραπτά του Kasten, τα οποία παρατίθενται παρακάτω από τον Culing.
Όταν οι ιστοί αφαιρούνται από το αντιδραστήριο Schiff και πλένονται, αναπόφευκτα μεταφέρονται στο υγρό πλύσης. Εάν χρησιμοποιείται νερό βρύσης, το αντιδραστήριο αλλάζει γρήγορα χρώμα και το νερό γίνεται πολύ κόκκινο. Αρχικά, υπήρχε κάποια ανησυχία ότι αυτό το αντιδραστήριο Schiff που συγκρατεί θα συμπεριφερόταν σαν βασικό λεκέ και λεκέ υφασμάτων, δίνοντας ψευδώς θετικά αποτελέσματα. Για το λόγο αυτό, συνιστώνται εκπλύσεις με θειώδες άλας. Διαλύουν το θειικό οξύ και χρησιμοποιούνται για να ξεπλύνουν το αντιδραστήριο του Schiff για αρκετά λεπτά, διαλύοντάς το αρκετά καλά πριν πλύνουν τα υφάσματα σε νερό, διασφαλίζοντας ότι δεν υπάρχει πιθανότητα λεκέδων χωρίς αλδεΰδη. Η εμπειρία πολλών ετών έχει δείξει ότι αυτά τα ξεβγάλματα δεν είναι απαραίτητα και καλό πλύσιμο νερό βρύσηςνερό εάν τα τμήματα δεν παραμείνουν στο αντιδραστήριο Schiff για να αποκατασταθεί το χρώμα. Εάν χρησιμοποιείται ένα ψευδο-αντιδραστήριο Schiff, οι τομές θα πρέπει να υποβάλλονται σε επεξεργασία με 1% υδροχλωρικό οξύ σε 70% αιθανόλη για 5-10 λεπτά μετά από αυτή την πλύση. Μερικά από αυτά είναι λεκιασμένα, δεν μπορούν να αποχρωματιστούν εντελώς και μπορούν να βαφτούν με τον ιοντικό μηχανισμό. Το όξινο αλκοόλ αφαιρεί κάθε τέτοιο χρωματισμό. Μετά τη θεραπεία με όξινη αλκοόλη, τα τμήματα πρέπει να πλένονται με νερό βρύσης ως συνήθως. Αν και το αντιδραστήριο Schiff χρησιμοποιείται για την ανίχνευση αλδεΰδων, αυτές συνήθως δεν βρίσκονται ελεύθερες στους ιστούς και πρέπει να παράγονται με κάποιο τρόπο. Υπάρχουν τρεις τρόποι που μπορεί να γίνει αυτό. Το πρώτο, και μακράν το πιο συνηθισμένο, είναι η οξείδωση ορισμένων συστατικών του ιστού. Αυτό δημιουργεί ομάδες αλδεΰδης, επιτρέποντας την εμφάνιση του υλικού στο οποίο είναι συνδεδεμένο το συστατικό. Ο δεύτερος τρόπος είναι να επεξεργαστούμε τα τμήματα με οξέα για να μετατρέψουμε μερικές από τις δεοξυριβόζες σε DNA και αλδεΰδες και στη συνέχεια να τα χρωματίσουμε με αντιδραστήριο Schiff. Το τρίτο είναι να εφαρμόσετε μια αλδεΰδη απευθείας στους ιστούς, συνήθως μια πρωτεΐνη, και στη συνέχεια να επιδείξετε την αλδεΰδη με το αντιδραστήριο Schiff. Αυτό το τελευταίο μπορεί να φανεί εύκολα με στερέωση γλουταραλδεΰδης για μικροσκοπία φωτός. Η γλουταραλδεΰδη έχει δύο ομάδες αλδεΰδης και εάν τα μόρια έλκονται στον ιστό μιας από αυτές, η άλλη παραμένει αδέσμευτη όταν ολοκληρωθεί η στερέωση. Εξαιτίας αυτού, με οποιαδήποτε διαδικασία που χρησιμοποιεί το αντιδραστήριο του Schiff, μεμονωμένες αλδεΰδες θα αντιδράσουν με αυτό, δημιουργώντας ένα βαθύ ροζ φόντο. Έτσι, πριν το αντιδραστήριο του Schiff μπορεί να εφαρμοστεί σε αυτά τα τμήματα, οι αλδεΰδες πρέπει να μπλοκαριστούν ώστε να μην μπορούν να αντιδράσουν. Για οποιαδήποτε ακριβή εφαρμογή που χρησιμοποιεί αυτό το αντιδραστήριο, θα πρέπει να χρησιμοποιούνται δύο χειριστήρια. Το πρώτο είναι το τμήμα στο οποίο έχει εφαρμοστεί ο αποκλεισμός αλδεΰδης. Το δεύτερο είναι ένα τμήμα στο οποίο το αντιδραστήριο Schiff εφαρμόστηκε στον ιστό χωρίς καμία προεργασία. Το πρώτο κόψιμο μπλοκάρει έτσι τυχόν προϋπάρχουσες αλδεΰδες, ενώ το δεύτερο αναδεικνύει τα σημεία όπου βρίσκονταν. Επιπλέον, φυσικά, πρέπει να χρησιμοποιούνται τομές με καθορισμένους αρνητικούς και θετικούς μάρτυρες για το στοιχείο ιστού στόχου. Εάν αυτοί οι δύο τελευταίοι μάρτυρες δεν λεκιαστούν όπως αναμένεται, τότε το αντιδραστήριο Schiff, και κανένα άλλο, θα πρέπει να εξεταστεί για να διασφαλιστεί ότι δεν έχει αλλοιωθεί και είναι κατάλληλο για χρήση. Ιστοχημεία: Θεωρητική και Εφαρμοσμένη Εκδ. 3 Pearse, A. G. E., 1968, 1972, τ. 1, σελ. 448 Churchill Livingstone, Edingburgh, London, UK Ιστολογικές και ιστοχημικές μέθοδοι: Θεωρία και πράξη Εκδ. 3 Κίρναν. J.A., 1999, σσ.203 Butterworth Heinemann Oxford, UK. Εγχειρίδιο ιστοπαθολογικών και ιστοχημικών τεχνικών
Εκδ. 3 Culling C. F.A., 1974, σελ. 249, 250 Butterworth London, UK. http://stainsfile. info/StainsFile/stain/schiff/schiffwhatis. htm Περιοδικό οξύ-αντίδραση Schiff Περιοδικό Οξύ - SchiffΗ αντίδραση PAS χρησιμοποιείται για να αποδείξει την παρουσία 1,2 γλυκολών και επομένως είναι μια σημαντική τεχνική στην ιστοχημεία των υδατανθράκων και στην ιστολογική επίδειξη πολλών δομών. Λύσεις Στερέωση και καλωδίωση Οι περισσότερες μέθοδοι συγκράτησης και καλωδίωσης είναι ικανοποιητικές. Μέθοδος 1. Φέρτε τα τμήματα στο νερό μέσω ξυλενίου και αιθανόλης. 2. Βάλτε σε περιοδικό οξύ για 10-30 λεπτά. 3. Ξεπλύνετε καλά σε νερό βρύσης. 4. Ξεπλύνετε με απεσταγμένο νερό. 5. Τοποθετήστε το στο αντιδραστήριο Schiff για 10-30 λεπτά. 6. Πλύνετε με απεσταγμένο νερό. 7. Πλύντε καλά σε νερό βρύσης για περίπου 10 λεπτά. 8. Τελειώστε με Mayer's Hemalum για 2 λεπτά. 9. Πλύνετε καλά με νερό βρύσης μέχρι να γίνει μπλε το αιμαλού του Mayer. 10. Αφυδατώνεται με αιθανόλη, διαυγάζεται με ξυλόλιο και ενσωματώνεται σε μέσο ρητίνης. Αναμενόμενα αποτελέσματα Σημειώσεις Τα σταθεροποιητικά γλουταραλδεΰδης απελευθερώνουν ελεύθερες ομάδες αλδεΰδης προσελκύοντάς τες στους ιστούς. Προκαλούν μια πλήρη ψευδώς θετική αντίδραση. Πρέπει να σταματήσει να αντιδρά με κατάλληλη διαδικασία όπως ο αποκλεισμός ανιλίνης-οξικού. · Το νερό της βρύσης στο βήμα 7 χρειάζεται για να αναπτυχθεί το κόκκινο χρώμα. Εντός ορίων, το μεγαλύτερο ξέπλυμα έχει ως αποτέλεσμα πιο σκούρο χρώμα. · Αρχικά, προτάθηκε η έκπλυση του αντιδραστηρίου Schiff με διάλυση θειικού οξέος (ξεπλύσιμο με θειώδες άλας). Ενώ το νερό επιστρέφει το χρώμα στο αντιδραστήριο Schiff, θεωρήθηκε ότι το πλυμένο νερό θα μπορούσε να οδηγήσει σε ψευδώς θετικά αποτελέσματα. Είναι πλέον γνωστό ότι αυτό δεν συμβαίνει εάν το αντιδραστήριο Schiff αφαιρεθεί γρήγορα και τα τμήματα δεν παραμείνουν στο νερό που έχει μολυνθεί με αυτό για πολύ. Η ακόλουθη λίστα, η οποία επίσης συντάχθηκε από την Culling, παρέχει τα θετικά CHIC υλικά που συναντώνται συνήθως, αν και δεν είναι εξαντλητική:
παραθέτω, αναφορά: Hotchkiss, R.D., 1948 Arch. Biochem, τόμος 16, σελ. 131 http://stainsfile. info/StainsFile/stain/schiff/pas-standard. htm Τελευταία ενημέρωση Αύγουστος 2003. |
